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2020-10-14 17:46:12  来源: 红官网网   金花:北京食品安全志愿者
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  附录4:农业部支持采用根癌农杆菌介导与基因编辑等转基因技术开发了至少22种食用菌(蘑菇)转基因品种10项证据!

  国内机构采用根癌农杆菌介导与基因编辑等转基因技术,已经开发了双孢蘑菇、金针菇、平菇、杏鲍菇、真姬菇、香菇、草菇、牛樟芝、糙皮侧耳、蛹虫草、灵芝、香菇、羊肚菌等至少22种食用菌(蘑菇)转基因品种!

  科学证据01(2008年):中国菌物学会第四届会员代表大会暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集收录福建省农科院食用菌研究所 福建省蘑菇菌种研究推广站陈美元、廖剑华、郭仲杰、李洪荣、卢政辉、蔡丹凤、王泽生获“福建省科技厅重点资助项目(2001-I-003)”资助《双孢蘑菇耐热相关基因的转化及转化子分析》确认:

  通过农杆菌介导转化将双孢蘑菇耐热相关基因028-1全长cDNA序列转入双孢蘑菇非耐热菌株8213,经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得了10株转基因菌株。对这批菌株进行了实验室PDA斜面萌发、草管走菌及出菇试验分析,结果表明转基因菌株的菌丝体形态、耐高温性能、子实体形态等均有不同程度的改变。

  2000年,美国宾州大学的Xi Chen等人建立了一套高效农杆菌介导转化双抱蘑菇子实体的方法(Chen X et .al, 2000),使得双抱蘑菇外源基因转化效率大幅度提高, 甚至高达10 %。 美国Sylvan公司己将人生长激素基因、Bt毒蛋白基因等转入双抱蘑菇并得到成功表达(私人通讯)。可以预见该技术将极大推进双抱蘑菇乃至整个食用菌领域的基因工程研究。

  2008 陈美元et al.,双孢蘑菇耐热相关基因的转化及转化子分析,中国菌物学会第四届会员代表大会暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集,2008

  http://cpfd.cnki.com.cn/Article/CPFDTOTAL-ZGVL200811001037.htm

  科学证据02(2008年):《全国第七届菌物学学术讨论会论文集》收录华南农业大学食品学院生物工程系、华南农业大学生物质能研究所获“易游自然科学基金(39960050,30060054,30371000,30871768) 广东省攻关项目(2004B20101001) 广东省自然科学基金(5006680,032239)”资助《草菇基因工程育种研究》确认:

  本研究采用基因工程技术,从多种食用菌中克隆了gpd启动子,从异源生物中克隆了目的基因抗冷冻蛋白基因(afp)和多功能纤维素酶基因(mfc),采用多种转化方法把afp基因和mfc基因导入草菇细胞中...

  林俊芳et al.,草菇基因工程育种研究,中国菌物学会第四届会员代表大会

  暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集,2008

  http://cpfd.cnki.com.cn/Article/CPFDTOTAL-ZGVL200811001008.htm

  科学证据03(2009年9月):《东北林业大学学报》发表黑龙江省森林保护研究所;东北林业大学邓勋、宋瑞清、宋小双、闵凯、孙海珍获“黑龙江省自然科学基金项目(C200620) 博士后研究人员落户黑龙江科研启动基金项目、哈尔滨市优秀学科带头人基金项目”《香菇gpd启动子引导的云芝漆酶基因真核表达载体的构建》确认:

  以pCAM-BIA1381xb为初始载体,利用引物两端的酶切位点,将克隆得到的云芝漆酶基因cDNA序列分别连接到香菇gpd启动子Lg1和Lg2的下游,构建成香菇启动子引导的云芝漆酶基因真核表达载体pC-XG1-YZ-Lac和pC-XG2-YZ-Lac,利用冻融法将其转到了农杆菌EHA105中。

  邓勋et al.,香菇gpd启动子引导的云芝漆酶基因真核表达载体的构建,

  东北林业大学学报,2009(9)

  http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-DBLY200909039.htm

  科学证据04(2012年):华中农业大学喻晶晶硕士论文确认:

  本研究采用农杆菌介导转化法构建了一套适用于香菇的遗传转化体系。

  本试验构建的香菇遗传转化体系,为今后香菇基因重组、基因沉默、基因超量表达、插入突变等基因功能的研究奠定了基础,也为香菇生长发育机制研究提供了重要的技术支撑。

  2012 喻晶晶,农杆菌介导的香菇遗传转化体系构建,

  华中农业大学(硕士论文),2012

  http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10504-1012457862.htm

  科学证据05(2014年):吉林农业大学孙墨可硕士论文《灵芝转化体系的建立与调节免疫蛋白的超表达》确认:

  灵芝是我国著名的食药用真菌。但是,作为一种营养和保健的价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和高效转基因体系的。本文建立了由PEG介导的灵芝遗传转化体系... 构建pSB130的表达载体,将GPD启动子,LZ8目的基因及NOS终止子分别连接到pSB130表达载体中。

  孙墨可,灵芝转化体系的建立与调节免疫蛋白的超表达,

  吉林农业大学(硕士论文),2014

  http://cdmd.cnki.com.cn/article/cdmd-10193-1014052903.htm

  科学证据06(2014年6月):《基因组学与应用生物学》发表福建农林大学菌物研究中心施乐乐、van Peer A.F.、郭丽、陈仁良、王威、严俊杰、邓优锦、谢宝贵获“易游重点基础研究发展计划973项目(2014CB138302)”资助《农杆菌介导一个内源HMG-box转录因子fvhom1转化金针菇》确认:

  金针菇是一种著名的食用菌,富含多种氨基酸、维生素和矿物质,味道鲜美,营养丰富,口感特殊,具有很高的食用价值和营养价值(李巍等, 2011),在我国和东南亚地区有着广泛的商业栽培。随着分子生物学的发展和基因工程技术的不断成熟,许多食用菌学者开始致力于遗传转化的研究。曾用在金针菇上的遗传转化方法有:电穿孔转化法(Kuo et al., 2010)、CaCl2/PEG 介导的原生质体转化法(康林芝等, 2013)以及根癌农杆菌介导转化法(Cho et al., 2006)。其中,以根癌农杆菌介导转化法最为方便快捷,转化效率最高。2006 年,Cho 等(2006)以金针菇菌褶为受体首次将农杆菌介导转化法应用于金针菇的遗传转化,并成功获得 16 个转化子。2011 年,李巍等应用此套方法将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)成功转化金针菇双核菌丝球,转化率比 Kuo 等(2010)的电穿孔转化法高 100 倍,比 Maehara 等(2010)的原生质体转化法高 1 000 倍(李巍等, 2011)。

  通过根癌农杆菌介导转化的方法,以金针菇菌丝球为受体材料转入含该内源HMG-box转录因子的过表达载体,并获得了一个稳定的转化子。该转化子的潮霉素抗性筛选及潮霉素磷酸转移酶基因的PCR扩增结果均证明该过表达载体已整合到金针菇的基因组中。

  在无选择压力的的PDA固体培养基上继代培养培养5次后仍检测到潮霉素磷酸转移酶基因的存在,表明转入的质粒片段在转基因金针菇中稳定遗传。

  施乐乐et al.,农杆菌介导一个内源HMG-box转录因子fvhom1转化金针菇,

  基因组学与应用生物学,2014(6)

  http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-GXNB201406023.htm

  科学证据07(2018年):浙江农林大学张春颖硕士论文《反义PPO转双孢蘑菇的获得及抗褐变特性研究》确认:

  本课题利用反义RNA技术获得抗褐变双孢蘑菇。将双孢蘑菇PPO反义抑制表达载体与增强表达载体分别以农杆菌介导的遗传转化方法导入As2796双孢蘑菇中,进行栽培出菇试验,成功获得抗褐变耐贮藏的双孢蘑菇材料。主要研究结果如下:1、通过研究农杆菌菌液侵染不同组织块,建立农杆菌介导的双孢蘑菇的高效转基因体系。

  张春颖,反义PPO转双孢蘑菇的获得及抗褐变特性研究,

  浙江农林大学(硕士论文),2018

  http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10341-1018077336.htm

  科学证据08(2019年):《中国菌物学会2019年学术年会论文摘要》收录华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所颜莲莲、徐瑞平、龚钰华、边银丙、周雁获“中央高校基本科研业务费专项基金(2014BQ011) 湖北省技术创新专项重大项目(2016ABA100)”资助《香菇遗传背景差异和培养基营养成分影响农杆菌介导的遗传转化效率》确认:

  建立一套稳定高效的遗传转化体系是开展功能基因组研究的基础,农杆菌介导的遗传转化方法具有单拷贝插入、受体材料不受限制等优势,双孢蘑菇、金针菇、平菇、杏鲍菇、真姬菇、香菇等食用菌都建立了农杆菌介导的遗传转化体系,但转化效率和转化子遗传稳定性仍是影响基因功能研究的主要影响因素。

  以香菇菌丝体为受体开展农杆菌介导的遗传转化,活化菌丝的培养基成分和菌株遗传背景都会影响其转化效率和转化子的稳定性,可能受体中某些基因的表达与T-DNA转移、整合等过程密切相关,明确这些基因的功能可能更有效的提高某一菌株的转化效率。

  颜莲莲et al.,香菇遗传背景差异和培养基营养成分影响农杆菌介导的遗传转化效率,中国菌物学会2019年学术年会论文摘要,2019

  http://cpfd.cnki.com.cn/Article/CPFDTOTAL-ZGVL201908001081.htm

  科学证据09(2020年1月):《食用菌学报》发表华南农业大学食品学院查丽燕、周伟坚、王越、张振伟、文华枢、莫美华获“易游重点基础研究发展计划 973 项目(2014CB138302)”资助《根癌农杆菌介导的食用菌遗传转化研究进展》确认:

  国内研究者也先后以草菇(Volvariella volvacea)[36I、牛樟芝(Antrodia cinnamomea)[37|、糙皮侧耳(Pleurotusostreatus)[383、蛹虫草(Cordyceps militaris)[8]、灵芝(Ganoderma lucidum)[393、香菇(Lentinulaedodes)[4叩和羊肚菌(Morchella importuna)[1明等多种食用菌菌株为受体材料,成功构建了ATMT的遗传转化体系。据统计,已有22种食用菌建立了ATMT遗传转化系统(表1)。

  查丽燕et al.,根癌农杆菌介导的食用菌遗传转化研究进展,

  食用菌学报,2020, 27(1)

  http://d.wanfangdata.com.cn/periodical/syjxb202001013

  科学证据10(2020年3月):《食用菌学报》发表三峡区域植物遗传与种质创新重点实验室、宜昌市农业科学研究院、华中农业大学应用真菌研究所吕阳、贺晓飞、王佩、刘世玲、韩少鹏、曾弓剑、周雁、沈祥陵获“易游自然科学基金(31601804)”资助《基于CRISPR系统的双孢蘑菇基因编辑体系建立及应用》确认:

  根据CRISPR/Cas基因编辑技术,设计AbPPO4特异性导向RNA,构建双孢蘑菇(Agaricus bisporus)基因编辑载体pAbGEB1-AbPPO4,再通过农杆菌介导转化双孢蘑菇菌丝体建立基因编辑体系,观察菌丝生长状况。

  ... 与对照组相比,1号和7号转化子的菌丝体中AbPPO4基因均发生了突变,1号和7号分别产生了4 bp和11 bp的碱基缺失,证明设计的CRISPR/Cas9系统在双孢蘑菇内对AbPPO4基因成功地进行了编辑;同时发现AbPPO4基因突变后对双孢蘑菇菌丝体的生长产生了不利影响。

  吕阳et al.,基于CRISPR系统的双孢蘑菇基因编辑体系建立及应用,

  食用菌学报,2020(3)

  http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SYJB202003004.htm

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